HITAlert™ Kit

Introduction

La thrombocytopénie induite à l’héparine (TIH) est un processus aigu à médiation immunitaire qui peut entraîner une thrombose potentiellement mortelle.

La TIH est causée par des anticorps activateurs des plaquettes, dépendants de l’héparine, qui se lient à des complexes constitués d’héparine et de facteur 4 plaquettaire (PF-4) (la plupart des cas cliniques), l’interleukine 8 (IL-8) ou l’activation des neutrophiles peptide 2 (NAP-2). La détection de ces anticorps est une fonction de laboratoire importante dans le processus d’établir le diagnostic de TIH.

Les anticorps sont initialement formés après 5 jours ou plus après le début du traitement à l’héparine. Une réponse immunitaire à l’héparine peut être observée en quelques minutes ou heures si le patient a déjà été exposé à l’héparine et que des anticorps circulent déjà.

Établir le diagnostic de TIH est difficile car de nombreux patients recevant de l’héparine présentent des comorbidités qui les prédisposent à la thrombocytopénie, et il peut donc être difficile d’être certain du diagnostic de TIH. En raison du mécanisme mentionnée ci-dessus, il est très important de rechercher la présence et la fonction des anticorps spécifiques complexes.

Diagnostics

Pour la détection de TIH, deux types différents de tests peuvent être utilisés: les tests immunologiques et fonctionnels.

Les tests immunologique (antigénémie) détectent les anticorps réactifs aux complexes du facteur plaquettaire de l’héparine 4 (PF4). Cependant, seule une fraction des patients positifs dans ces tests développent un TIH clinique. D’autre part les anticorps pathogènes peuvent également réagir avec d’autres complexes d’héparine, tels que l’héparine-interleukine-8, ou le peptide activant l’héparine-neutrophile 2, donc, ne sont pas détectés par les tests immunologiques PF4.

Les tests fonctionnels reproduisent la physiopathologie in vivo et sont fortement corrélés avec la présentation clinique de TIH. Un test fonctionnel est le test de libération de sérotonine (SRA), avec une sensible et spécifique élevées, mais n’est pas un test préférable en raison de l’utilisation de radio-isotypes. Un autre test fonctionnel est le test d’agrégation, mais il a une faible sensibilité et une longue durée d’exécution. Le HITAlert™ est un test fonctionnel basé sur la cytométrie en flux et sera expliqué plus en détail ci-dessous.

Des publications (Garritsen, Solano) montrent que la spécificité du kit HITAlert™ est en accord à 100% et 99% respectivement en comparaison avec le SRA et un test immunologique PF4. La sensibilité du kit HITAlert™ par rapport au SRA s’est avérée être de 81% et de 88% par rapport à un test immunologique PF4.

Les résultats du kit HITAlert™ doivent toujours être utilisés ensemble avec les résultats cliniques (symptômes et test 4T) et d’autres tests sérologiques.

Principe du HITAlert™ Kit

En 2012, l’American College of Chest Physicians (ACCP) a publié des mises à jour sur les recommandations pour les tests de TIH. Ici, ils déclarent que pas tous les anticorps détectés par les tests immunitaires ne sont capables de provoquer une TIH clinique ; par conséquent, la spécificité de ces tests n’est que modérée. La directive décrit divers cas dans lesquels un test fonctionnel doit être effectué pour confirmer le diagnostic de TIH. Le kit HITAlert™ est un tel test fonctionnel.

Lorsque des anticorps pathogènes sont présents dans le sérum du patient, l’activation des plaquettes du donneur est montrée à l’aide d’un marqueur d’activation plaquettaire. En combinant le marqueur d’activation avec un anticorps pour identifier les plaquettes, cette réaction peut être visualisée par cytométrie en flux.

Résultats

Figure: Résultats du HITAlert™ kit affichés pour chaque échantillon, y compris l’analyse d’un échantillon de patient: (A) Sélection des plaquettes. (B) Échantillon non stimulé. (C) Échantillon stimulé avec du Ca-ionophore. (D) Échantillon de patient positif sans héparine. (E) Échantillon de patient positif avec héparine (F) Échantillon de patient positif avec excès d’héparine.